细胞破碎程度如何判断-细胞破碎程度如何判断
细胞破碎程度可以通过视察细胞形态变化、细胞破裂率、细胞膜完全性、细胞内物资的变化等方法来判断。具体来讲,可以通过以下几个方面来判断细胞破碎程度:
1、 视察细胞形态变化:破碎程度越严重,细胞的形态就越不规则,结构也变得模糊。
2、 细胞破裂率:通过测定细胞破裂时释放的物资(如溶血素)来计算细胞破裂率,以此来判断细胞破碎的程度。
3、 细胞膜完全性:使用荧光探针或其他检测方法可以视察到细胞膜的完全性,从而推断细胞破碎的程度。
4、 细胞内物资的变化:通过视察细胞内的蛋白质和核酸等物资的散布情况,和其活性的变化,可以进一步判断细胞破碎的程度。例如,如果细胞内的蛋白质散布明显减少,或某些酶的活性显著下降,则说明细胞已遭到了严重的破坏。
细胞物理破碎法的优缺点是什么?
细胞破碎的三种方法。
一,酸碱处理:调节pH值,改变蛋白质的荷电性质,提高产物的溶解度。
二,化学试剂处理:用表面活性剂或有机溶剂(甲苯)处理细胞,增大细胞壁的通透性,降低胞内产物的相互作用,使之容易释放。
三,酶溶:利用溶解细胞壁的酶处理菌体细胞,使细胞壁受到部分或完全破坏后,再利用渗透压冲击等方法破坏细胞膜,进一步增大胞内产物的通透性。酶溶的优点:操作温和,选择性强,酶能快速地破坏细胞壁,而不影响细胞内含物的质量,但缺点是酶的费用高,因而限制了它在大规模生产中的应用。化学渗透法与机械破碎法相比:速度低,效率差,且化学或生化试剂的添加形成新的污染,给进一步的分离纯化增添麻烦。但化学渗透法选择性高,胞内产物的总释放率低,可有效抑制核酸的释放,料液粘度小,有利于后处理。
1、高速组织捣碎
将材料配成稀糊状液,放置于筒内约1/3体积,盖紧筒盖,将调速器先拨至最慢处,开动开关后,逐步加速至所需速度。此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等。
2、玻璃匀浆器匀浆
先将剪碎的组织置于管中,再套入研杆来回研磨,上下移动,即可将细胞研碎,此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高,适用于量少和动物脏器组织。
3、超声波处理法
用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂,此法多适用于微生物材料,用大肠杆菌制备各种酶,常选用50-100毫克菌体/毫升浓度,在1KG至10KG频率下处理10-15分钟,此法的缺点是在处理过程会产生大量的热,应采取相应降温措施。对超声波敏感和核酸应慎用。
细胞共性
1、所有的细胞表面均有由磷脂双分子层与镶嵌蛋白质及糖被构成的生物膜(注意:癌细胞无糖被,容易游走扩散),即细胞膜。
2、所有的细胞都含有两种核酸:即DNA与RNA。
3、作为遗传信息复制与转录的载体。
4、作为蛋白质合成的机器——核糖体,毫无例外地存在于一切细胞内。核糖体,是蛋白质合成的必须机器,在细胞遗传信息流的传递中起着必不可少的作用。
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